為測量平均值；ΔI為測量平均值與標準值之差，即吸光度準確度)。OLYMPUS AU400型全自動生化分析儀計量檢測方法探討
李曉麗
一、生化分析儀計量現狀
生化分析儀是醫院必不可少的檢查儀器，生化項目測定、激素、免疫球蛋白、血藥濃度等特殊化合物的測定以及酶免疫、熒光免疫等分析離不開生化分析儀。隨著國民經濟的高速發展，科學技術的不斷進步，以往的半自動生化分析儀逐漸被全自動生化分析儀所取代，在各級醫療衛生機構中廣泛使用。全自動生化分析儀是將生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、保溫、比色、結果計算、書寫報告和清理等步驟的部分或全部由模仿手工操作的儀器來完成。全自動生化分析儀的準確性如何，直接影響著醫生對病人病情的判斷，這就對計量部門檢測生化分析儀提出了更高的技術要求。JJG464-1996《生化分析儀》檢定規程相對于全自動生化分析儀的檢定來說，有一定的局限性。
二、普通檢測方法存在的問題
檢測全自動生化分析儀普通方法是通過加樣針在樣品(檢測用標準物質)中加入反應試劑(相同的標準物質)，攪拌均勻后，由泵依次吸至比色池中進行比色，經信號處理后，記錄或打印出結果。即采用全自動生化分析儀分析樣品時的工作程序來檢測標準物質的吸光度，或者采用直接把標準物質放入試劑盒中，用測定試劑空白的方法檢測標準物質的吸光度。根據筆者的經驗，這兩種方法檢測出的吸光度數值比實際值偏低，其原因是這種方法引入了試劑針和樣本針在清洗過程后殘留的清洗液，這對標準物質起到了稀釋的作用。根據朗伯-比爾定律，物質的濃度降低，吸光度也會隨之減小。
三、使用探討檢測方法檢定全自動生化分析儀舉例
由于普通檢測方法存在檢測出的吸光度數值比實際值偏低的問題，我們在檢定時一般將通過加樣針在樣品中加入反應試劑的過程跳過，直接手動將標準物質添加至比色杯中，我們稱之為探討檢測方法。下面以OLYMPUS AU400型全自動生化分析儀為例，來闡述探討檢測方法的檢測流程。
1.準備工作
(1)啟動系統，系統將進行初始化(Initialization)及預熱(Warm-Up)操作，并轉到待機(Stand by)狀態。等待20min以上，使光源燈穩定。
(2)將儀器置于停機(Stop)狀態下。取下清洗系統及攪拌棒，打開比色杯輪盤系統的蓋子，露出比色杯。選擇350μL的移液器一把，依次將蒸餾水、亞硝酸鈉標準溶液、吸光度標準溶液1-1、1-2和質量濃度為2.0g/L、4.0g/L、6.0g/L、8.0g/L、10.0g/L的氯化鉆標準溶液分別加至比色杯中。注意:加樣前應確保比色杯干燥，無殘留清洗液。加樣時避免產生氣泡，以免影響檢測結果。加樣完成后蓋上蓋子。
2.開始測試
在保養[Maintenance]菜單內選擇主要保養[Maker Maintenance]子菜單，點擊ANL Diag(分析儀診斷)。
依次按以下步驟操作:Combination(綜合)→A/0-100%(Abs)→Print,No□(在此選擇要打印比色杯的編號)，點擊YES開始測試。
3.結果讀數
測試完成后，在界面上會顯示每個反應杯在各波長下測試的吸光度值(注意:這里的吸光度值都是×10000后的值，如安裝打印機即可將結果打印出來)。各裝有標準物質比色杯的吸光度值與相應波長下裝有蒸餾水的比色杯的吸光度值(即杯空白)之差為該比色杯內溶液在該波長下的吸光度。
4.清洗比色杯
讀數完成后，將清洗系統及攪拌棒復位。當分析過程被強制停止后，應作一次清洗1(W1)來清洗比色杯內殘留的試劑。
(1)在“系統狀態”屏幕下按F5(W1)清洗1鍵。為進行清洗1，將對系統各部分復位，如果在復位中發現嚴重問題(如清洗系統復位不正常)，將不能執行W1命令。
(2)按“YES”鈕，開始清洗1過程，清洗比色杯內部。執行W1時，運行過程的狀態將顯示在對話框內，W1約需9min。
由于全自動生化分析儀的工作原理基本相同，該方法適合絕大部分全自動生化分析儀的檢測，只是不同型號的全自動生化分析儀工作界面和操作方法有所不同，筆者在此不再贅述。
四、普通檢測方法和探討檢測方法檢定數據的比較
下面仍以OLYMPUS AU400型全自動生化分析儀為例，以標準值為0.490和0.979的吸光度標準溶液1-1和1-2為檢定用標準物質，在相同條件下對同一臺OLYMPUS AU400型全自動生化分析儀吸光度準確度采用3種方法各檢測8次，對得出的吸光度準確度的數值進行記錄，得出表1、表2(表中:I1為全自動生化分析儀分析樣本時的操作程序，即試劑盒和樣本盒放入同一種標準物質，此時試劑針和樣本針同時參與檢測工作；I2為將吸光度標準溶液放入試劑盒中，通過檢測試劑空白的方法測得的吸光度數值，此時試劑針參與檢測工作；I3為將吸光度標準溶液通過移液器直接加入比色杯中進行檢測的吸光度數值，即探討檢測方法；為測量平均值；ΔI為測量平均值與標準值之差，即吸光度準確度)。
<CTSM> 表1 標準值為0.490時吸光度準確度</CTSM>
<CTSM> 表2 標準值為0.979時吸光度準確度</CTSM>
由上述檢測方法得出的數據可以看出，使用全自動生化分析儀分析樣本時的操作程序，即試劑盒和樣本盒放入同一種標準物質得出的吸光度準確度分別為-0.039和-0.066，根據JJG464-1996判定C級合格。將吸光度標準溶液放入試劑盒中，通過檢測試劑空白的方法測得的吸光度準確度分別為-0.018和-0.040，根據JJG464-1996判定B級合格。而采用探討檢測方法測得的吸光度準確度分別為-0.006和-0.011，根據JJG464-1996判定可以達到A級合格。
五、現有規程有待完善
通過對全自動生化分析儀的普通檢測方法和探討檢測方法檢定數據的比較，可以得出以下結論:現有檢定規程對于全自動生化分析儀的計量檢測有一定的局限。尤其是吸光度準確度這一項，受清洗系統、加樣系統的影響較大，使用普通的檢定方法會給全自動生化分析儀的計量檢測帶來不可避免的誤差。
六、結束語
綜上筆者認為，對全自動生化分析儀進行檢測時，應該使用探討檢測方法，這樣可以有效地避免殘留清洗液對標準物質的稀釋影響，更準確直接地反映比色杯的工作性能。
作者單位【北京市海淀區計量檢測所】
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